大鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒操作步驟:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
SOC Medium
2×YT肉湯 250用于基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng)
2×YT Broth
TB培養(yǎng)基 250用于基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng),營(yíng)養(yǎng)豐富
Terrific Broth
SB培養(yǎng)基 250用于基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng),營(yíng)養(yǎng)非常豐富
Super Broth
HB-PE自誘導(dǎo)培養(yǎng)基 250用于基因工程菌大腸桿菌自誘導(dǎo)蛋白表達(dá)培養(yǎng)
HB-PET Auto Express Medium
即用型平板培養(yǎng)基
平板計(jì)數(shù)瓊脂平板(9cm)10個(gè)/包國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂,含糖,用于細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定
Plate Count Agar
營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板(9cm)10個(gè)/包細(xì)菌計(jì)數(shù)、不含糖,可作血瓊脂基礎(chǔ)和傳代用
Nutrient Agar
血平皿(9cm)10個(gè)/包用于一般細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和溶血試驗(yàn)
Blood Agar Plates
哥倫比亞血瓊脂平板(9cm)10個(gè)/包用于營(yíng)養(yǎng)要求高細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和溶血試驗(yàn)
Columbia Blood Agar
巧克力瓊脂平板(9cm)10個(gè)/包用于嗜血桿菌、奈瑟氏菌分離培養(yǎng)
Chocolate Agar
伊紅美藍(lán)瓊脂平板(9cm)10個(gè)/包弱選擇性培養(yǎng)基、用于分離腸道致病菌,特別是大腸桿菌
Eosin-Methylene Blue Agar
SS瓊脂平板(9cm)10個(gè)/包用于沙門氏菌、志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)
Salmonella Shigella Agar
HE瓊脂平板(9cm)10個(gè)/包用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)
Hektoen Enteric Agar
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