“雜音"染色種類繁多,產生的原因也多種多樣,為了便于說明,筆者將其歸納為下面幾種。
1、灶片狀著色
切片中著色區(qū)東一塊西一塊,呈灶片狀分布,出現這種問題的原因有:(1)裱片時水未排盡,在局部形成氣泡使組織突起,染色時試劑滲入后不易洗盡,顯色過深所致。解決辦法是,漂片盒里的氣泡應去盡,晾片熱臺不能平放,應有45度左右的斜度,利于水流走和蒸發(fā)。(2)壞死組織灶,組織壞死后細胞破壞、酶的釋放、蛋白游離、分解,復雜的肽鏈殘段(如Fc段)可能與一抗或/和二抗結合導致zui終著色。解決辦法是在選擇染色切片時應避免選擇壞死組織較多的切片。(3)制作APES膠片時,膠的濃度太高,干燥后在玻片上留下白色小點,顯色時白色小點著色。解決辦法是按照標準的制備方法進行,即5%鹽酸酒精(5 ml鹽酸+95%酒精95 ml)浸泡玻片4小時、熱水沖洗玻片1小時、蒸餾水洗玻片1分鐘、丙酮浸泡玻片5秒鐘后空氣干燥(室溫)、2% APES(2 ml APES+98 ml丙酮)浸泡玻片5分鐘、玻片過一下丙酮(1-2秒鐘)、玻片過一下蒸餾水(1-2秒鐘)、37 度干燥、室溫儲存?zhèn)溆?。如果制片過程中,因丙酮逐漸揮發(fā)而膠變濃時可適當加入一些丙酮。
2、3、細胞核著色
不適當的組織處理可以出現細胞核著色,如組織在二甲苯里浸泡時間太長(如從星期五浸泡到下星期一)、緩沖液中浸泡時間太長、組織變干、微波修復液的PH值和修復時間不當或修復過程中修復液留下得太少,未沒過組織等。解決辦法是嚴格按照操作常規(guī)進行工作。
4、間質著色
著色部位主要在間質,間質著色的原因很多,如抗體與組織中的蛋白質因蛋白疏水基團相互作用形成非特異性的連接而著色,加一抗前的血清封閉這一步就是為了避免非特異型的結合。又如血清中的免疫球蛋白常常滲出到組織間質,很容易與抗體結合,造成間質著色,特別是lambda和kappa染色時。當甲狀腺膠質外溢到組織間質時,做甲狀腺球蛋白染色也會出現間質著色。抗體不純或抗體被污染也可出現間質著色,我們曾遇到CD20抗體不純,除了染上B細胞外還染上了間質。
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